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Título : ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD DEL HDAC1 EN LA EXPRESIÓN DEL VHL Y DEL VEGF EN EL QUERATINOCITO
Autor : Dr. Cancino Díaz, Juan Carlos
Dr. Cancino Díaz, Mario E.
M. EN C. REYNOSO ROLDAN, ANGELICA
Palabras clave : HDAC1
VHL
VEGF
QUERATINOCITO
Fecha de publicación : 22-nov-2010
Resumen : In the psoriatic skin the angiogenesis is activated and the keratinocyte plays an important role in the production of VEGF, nevertheless the mechanism to regulate VEGF expression in this cell remains unknown. In hypoxic tumoral tissues the expression of VEGF is regulated by HIF 1alpha. HIF-1alpha is ubiquitinated by VHL for its proteosomal-degradation and it can be inhibited by HDAC1 and LL-37 activity. Objective: Since VEGF, HDAC1, and LL-37 but not VHL, have been found over-expressed in the psoriatic skin, we studied the participation of these molecules in the regulation of VEGF expression in the keratinocyte. Methods: hdac1, vhl and ll-37 genes were cloned to transfect HaCaT cells. Inhibitors of HDAC1 (TSA and HDAC1- siRNA) were also assayed. RT-PCR and ELISA were developed to analyze the expression of VEGF in the transfected-cells. HIF-1alpha was also analyzed by immunofluorescence in these cells. Results: The production of VEGF was increased in HDAC1 and LL-37-transfected HaCaT cells (p<0.05) meanwhile VEGF production decreased in HaCaT cells treated with TSA and HDAC1-siRNA, and in VHL-transfected HaCaT cells. The levels of expression of intracytoplasmic HIF-1alpha were high in pLL37-transfected cells but low in pVHL- and pHDAC1- transfected cells. HIF-1alpha was only detected into the nucleus of HDAC1-transfected cells. The expression of VEGF and HIF-1alpha was high in pHDAC1- and pLL-37-co-transfected cells, and both expressions decreased when pVHL was present. Discussion: The results of this study are consistent with those reported by other authors,, which showed that HDAC1 is able to inhibit the activity of proteins other than histones as the VHL in different cell lines, in this study we studied functional activity of HDAC1 in HaCat keratinocytes, VHL inhibitory activity leads to decreased expression of VEGF due to the blockade of proteasomal degradation of HIF-1 alpha. Conclusions: These data demonstrate that HDAC1, LL-37 and VHL modulate the expression of VEGF via HIF-1alpha in keratinocytes.
Descripción : En la piel psoriásica la angiogénesis es activada y los queratinocitos juegan un papel importante en la producción de VEGF, sin embargo, el mecanismo para regular la expresión de VEGF en este tipo celular se desconoce. En hipóxia, en los tejidos tumorales la expresión de VEGF está regulada por HIF-1 alfa. HIF-1 alfa es ubiquitinado por el VHL para su degradación proteosomal y este a su vez puede ser inhibido por la actividad de HDAC1 y LL-37. Objetivo: Dado que el VEGF, HDAC1, y LL-37 pero no el VHL, se han encontrado sobre-expresado en la piel psoriásica, se estudió la participación de estas moléculas en la regulación de la expresión de VEGF en los queratinocitos. Métodos: los genes de hdac1, vhl y ll-37 fueron clonados para transfectarlos en células HaCaT. Los inhibidores de HDAC1 (TSA y siRNA-HDAC1) se analizaron también. La RT-PCR y ELISA se realizaron para analizar la expresión de VEGF en las células transfectadas. HIF-1 alfa también fue analizado mediante inmunofluorescencia de estas células. Resultados: La producción de VEGF se incrementó en células HaCaT transfectadas con HDAC1 y LL-37 (p <0.05) mientras que la producción de VEGF en las células HaCaT tratados con TSA y HDAC1-siRNA y en las células HaCaT transfectadas con VHL disminuyo. Los niveles de expresión de HIF-1 alfa intracitoplasmáticos fueron elevados en las células transfectadas con pLL37, pero disminuyeron en células transfectadas con pVHL y pHDAC1. HIF-1 alfa sólo se detectó en el núcleo de las células transfectadas con HDAC1. La expresión de VEGF y HIF-1 alfa fue alta en células co-transfectadas con pHDAC1 y pLL-37, y la expresión de ambas disminuyó cuando pVHL estaba presente. Discusión: Los resultados obtenidos ser congruentes con los reportados por otros autores, donde se demostró que el HDAC1 es capaz de inhibir la actividad de otras proteínas diferentes a las histonas como el VHL en diferentes líneas celulares, es este estudio se estudió actividad funcional de HDAC1 en los queratinocitos HaCat, su actividad inhibitoria sobre VHL conduce a la disminución de la expresión de VEGF debido al bloqueo de la degradación proteasomal de HIF-1 alfa. Conclusiones: Estos datos demuestran que HDAC1, LL-37 y el VHL modulan la expresión de VEGF a través de HIF-1 alfa en los queratinocitos.
URI : http://www.repositoriodigital.ipn.mx/handle/123456789/16137
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