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Título : Escrutinio masivo de un banco de germoplasma para obtener microorganismos antagonistas a Fusarium verticillioides
Autor : FIGUEROA LÓPEZ, ALEJANDRO MIGUEL
Palabras clave : banco de germoplasma
Fusarium verticillioides
Fecha de publicación : 25-nov-2011
Resumen : Maize crop is one of the most important worldwide. Seven species of Fusarium have been associated to ear, root and stem rot. , from which F. verticillioides is the most important. This study aimed to find new biocontrol techniques to control the disease caused by this phytopathogenic fungus in Sinaloa. Fusarium verticillioides (99% identity at the nucleotide level in the ITS rDNA region) isolates were used to monitor 11,520 isolates corresponding to a germplasm bank using a massive antagonism assay in liquid medium for their antagonist ability against this pathogen. The antagonic activity was monitored on PDB media, in which the phytopathogenic fungi and the bacterial isolates were grown as dual cultures. Fungal biomass was quantified using WGA Alexa Fluor 488. 622 isolates were selected for their ability to decrease at least 60% mycelial growth of F. verticillioides. To confirm their antagonic effect in solid medium, PDA 96-well plates were used and 42 isolates were selected under the criterion that they caused over 45% inhibition of fungal growth in solid media. Most of the 42 selected microorganisms belong to the genus Bacillus, Pseudomonas y Paenibacillus. Hemolysis assays on the 42 selected strains rendered 14 that showed alpha or gamma hemolysis. Three isolates were additionally selected since they exhibited antagonistic potential against F. verticillioides in planta either due to their ability to produce quitinases, auxins or other mechanisms of plant growth promotion.
Descripción : El maíz es uno de los cereales más importantes a nivel mundial. Se han reportado siete especies de Fusarium asociados a la pudrición de mazorca, tallo y raíces, de las cuales F. verticillioides ha sido la más importante. El objetivo de este estudio fue encontrar nuevas técnicas para evaluar el antagonismo de organismos nativos contra este patógeno. Aislados de F. verticillioides (99% de identidad a nivel nucleotídico de la región ITS del ADN ribosomal) previamente identificados mediante herramientas moleculares se emplearon en pruebas de antagonismo en sustrato líquido y de manera preliminar se probaron 11,520 aislados bacterianos, provenientes de la rizosfera de maíz, contra F. verticillioides. La actividad antagónica se monitoreó en caldo de papa-dextrosa, en el cual los aislados bacterianos y el hongo crecieron como cultivo duales. La masa fúngica se cuantificó con WGA Alexa Fluor 488. Se seleccionaron 622 aislados a partir de esta prueba empleando como criterio la disminución de al menos el 60% de crecimiento de la biomasa del hongo en presencia de un determinado aislado bacteriano. Los 622 microorganismos seleccionados se analizaron de nuevo contra el patógeno en papa-dextrosa-agar (PDA). A partir de este bioensayo se seleccionaron 42 aislados que mostraron ser antagonistas en PDA. Éstos mostraron un efecto inhibitorio contra F. verticillioides y los porcentajes de inhibición en estas pruebas fueron mayores al 45%. De los 42 organismos la mayoría pertenecen al género Bacillus, Pseudomonas y Paenibacillus. En pruebas de hemólisis para descartar posibles patógenos al humano se analizaron los 42 obtenidos de las pruebas en PDA y se seleccionaron 14 que mostraron hemólisis tipo alfa (parcial) y gamma (ausencia de lisis). De los 14 aislados, tres mostraron efecto de bioprotección contra F. verticillioides en planta de maíz ya sea mediante la producción de quitinasas, auxinas o algún otro mecanismo promotor de crecimiento vegetal.
URI : http://www.repositoriodigital.ipn.mx/handle/123456789/15782
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