Activación del sistema fenoloxidasa de hemocitos de camarón café (Penaeus californiensis) y su efecto en la fagocitosis.

Abstract

El sistema proFO ha sido encontrado en el plasma y los hemocitos de insectos. En crustáceos, el sistema proFO solamente se ha detectado en el interior de los hemocitos, lo cual ha sido confirmado en el presente estudio. Adicionalmente, se encontró que la fuerza mecánica, como la centrifugación a 800 g, pero no lo turbulencia producida por la aguja durante la toma de hemolinfa, causo la liberación del sistema proFO al plasma. El uso de amortiguador de cacodilatos, conteniendo menores concentraciones de sal que las existentes en el plasma de los camarones, provoco la liberación de la proFO sin rompimiento celular, lo cual se comprobó por microscopía. La mayor concentración de proFO (100%) se libero cuando se incubaron los hemocitos en amortiguador de cacodilatos sin NaCI, mientras que la menor concentración (8%), se libero cuando se incubaron las células en amortiguador de cacodilatos conteniendo NaCI entre 400 y 500 mM. La proFO y la enzima activadora (EApFO) pudo ser obtenida en forma estable a partir de los hemocitos, utilizando amortiguador de cacodilatos sin calcio. El uso del amortiguador de cacodilatos conteniendo entre 5 y 200 mM de calcio, promovió la activación de la proFO a FO. Las sales de magnesio y manganeso fueron menos efectivas en la promoción de esta activación. Sin embargo, la activación por calcio se redujo por la adición de un inhibidor de tripsina (STI) a la solución, lo que sugiere que el mecanismo que involucra al calcio es catalizado por la enzima activadora de la proFO. El uso de amortiguador de cacodilatos sin calcio y sin NaCI, y la centrifugación a 15,900 g, produjo mejores resultados en comparación con la técnica previamente usada para producir SLH. El uso de esta técnica permitió la obtención de proFO de manera más fácil, rápida y produjo muestras, probablemente con menor concentración de proteínas contaminantes no relacionadas con el sistema proFO. La proFO del camarón café fue activada por B-glucanos, pero no por LPS. La activación por glucanos fue dependiente del número de lote y la concentración del reactivo. Algunas bacterias marinas y levaduras marinas no activaron la proFO libre de células. La tripsina bovina, quimotripsina bovina y la papaína activaron la proFO, demostrando que una vía enzimática está involucrada en la producción de FO. Sin embargo, se observo una vía adicional cuando se activo la proFO con etanol o SDS aun en presencia de STI. En un sistema alternativo, la proFO se encontró en el sobrenadante cuando se incubo una suspensión de hemocitos en SIC conteniendo B-glucanos, bacterias marinas o levaduras marinas. Sin embargo, los LPS no tuvieron el mismo efecto. La FO libre de células promovió la capacidad fagocítica de los hemocitos del camarón café, siendo mayor el efecto producido por la enzima cuando se obtuvo por centrifugación y activada por tripsina que la FO obtenida por estimulación de los hemocitos por B-glucanos.