Extracción de ADN en larvas de Engraulis mordax preservadas en formalina y estimación de diversidad genética en el Golfo de California.

Abstract

La anchoveta norteña Engraulis mordax, es un pez pelágico de importancia ecológica y económica en el Pacifico Nororiental. En esta especie surge la necesidad de realizar estudios que contribuyan al conocimiento de su estructura genético-poblacional, debido a que aun existe desconocimiento sobre si la subpoblación de E. mordax que habita dentro del Golfo de California es residente y/o es una extensión de la subpoblación sureña de la Costa Occidental de la Península de Baja California. Los avances en el campo de la biología molecular e investigación médica en los últimos 20 años, han abierto la posibilidad de utilizar especímenes preservados en formalina en estudios de genética poblacional. En base a lo anterior los objetivos de este trabajo fueron: determinar que técnica de extracción de ADN permite la obtención de ADN de calidad de larvas de E. mordax preservadas en formalina (4%) y estimar la diversidad genetica mediante analisis de RFLP en una muestra de adultos preservados en etanol (70%). tanto las larvas como los adultos de E. mordax provinieron de la región central del Golfo de California. Con las larvas se probaron diez técnicas de extracción de ADN diferentes, obteniéndose resultados solo con cuatro de ellas. Estas extracciones se intentaron amplificar con iniciadores propuestos para distintas fracciones de ADN mitocondrial (NADH1, 16s ARNr, 12s ARNr y región control) de distintos tamaños (entre 176 y 1,930 pb), no obteniéndose resultados satisfactorios. Este ADN no se pudo amplificar debido a que se encuentra muy degradado por efecto de la preservación en formalina por varios años. Las extracciones de ADN de adultos, mediante la técnica de extracción fenol-cloroformo, sirvieron para la amplificación de tres fracciones del ADN mitocondrial (NDH1, 16s ARNr y región control), para secuenciación de las fracciones 16 s ARNr y región control, y para un análisis de diversidad de haplotipos mediante RFLP de la región control. Para esta última, el ADN de 41 adultos fue amplificado y digerido exitosamente con siete enzimas de restricción (Alu I, EcoR I, Fok I, Sau 961 Taq I Xba I y Xmn I). Los resultados de este último análisis revelaron una muy baja diversidad genética (h=0.1866), que muy probablemente es producto de un reducido tamaño poblacional efectivo (Nf).