Extracción y caracterización de polisacáridos con actividad anticoagulante a partir de algas colectadas en Baja California Sur, México.

Abstract

Se realizó una evaluación preliminar de macroalgas de Baja California Sur (México) en búsqueda de nuevas fuentes de polisacáridos con propiedades moduladoras de la coagulación sanguínea. Se colectaron veintiún especies algales en diferentes localidades de Baja California Sur. Cada especie fue sucesivamente extraída con agua destilada a 25 y 80°C. Los extractos fueron sometidos a los ensayos de tiempo de protrombina (TP) y tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA). De los 41 extractos ensayados, 9 (22%) mostraron actividad en el ensayo de TP, y 29 (70%) fueron activas en el ensayo de TTPA. El extracto obtenido a 25°C a partir de Eisenia arborea fue el más activo, incrementando el TP y TTPA control a más de 300 s a una concentración de 322.3 μg mL-1. El extracto de Eisenia arborea se seleccionó para ser sometido a análisis adicional hasta caracterizar la estructura y actividad de la fracción anticoagulante. En la segunda parte de este estudio, 100 g de Eisenia arborea seca y molida fueron extraídos con agua a 25°C. El extracto se precipitó diferencialmente con etanol, y se obtuvieron 3 fracciones (MM049F1, MM049F2 y MM049F3). El tejido algal residual se sometió a dos pasos adicionales de extracción con agua a 80°C dando las fracciones MM049C1 y MM049C2. De las 5 fracciones obtenidas a partir de Eisenia arborea, MM049F1 se seleccionó para fraccionamiento. 1.85 g de MM049F1 fueron disueltos en 20 mL de agua destilada y precipitados con etanol para dar 1.237 g. De ellos, 1.022 g se fraccionaron por cromatografía de intercambio iónico sobre DEAE-celulosa. La muestra se eluyó con soluciones acuosas de cloruro de sodio (0.5, 1.0 y 2.0 M). El patrón de fraccionamiento se monitoreo por medio de la reacción del fenol-H2SO4. Se obtuvieron 3 fracciones (CC2F1, CC2F2 y CC2F3). La fracción CC2F2 eluída con cloruro de sodio 1 M fue la más activa, mostrando un TP y TTPA >300 s. El espectro de infrarrojo de la fracción CC2F2 mostró bandas de absorción a 3470, 1730, 1640, 1245, 1035, 840 y 820 cm-1 las cuales son típicas de fucanos sulfatados. El análisis químico mostró que CC2F2 contenía 56% de azúcares totales (31.6% fucosa y 1.3% ácidos urónicos) y 45% de sulfatos totales. En conclusión, de los 41 extractos ensayados, el obtenido a partir de Eisenia arborea a 25°C fue el más activo en los ensayos de TP y TTPA. El fraccionamiento de MM049F1 nos condujo al islamiento de 3 fracciones. La fracción más activa se identificó como un heterofucano sulfatado caracterizado por fucosa unida por enlaces (1→3) y una alta proporción de grupos éster sulfato en posición axial al C-4 y/o grupos acetato.