CULTIVO DE BROTES DE Castilleja tenuiflora BENTH. EN UN BIORREACTOR DE INMERSIÓN TEMPORAL: ACUMULACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS, FLAVONOIDES Y SU ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE.

Abstract

Castilleja tenuiflora Benth. (Orobanchaceae antes Scrophulariaceae), “hierba del cáncer” es una planta silvestre que produce iridoides, compuestos fenólicos y flavonoides, con actividad citotóxica,inmunoestimulante y antioxidante. Se han implementado sistemas de cultivo para la multiplicación invitro de los brotes de esta especie en medio de cultivo semisólido (convencional) y en inmersión permanente (CIP) obteniendo índices de multiplicación (IMB) de 2-4 y de 7-9 brotes/explante, respectivamente. Sin embargo, en CIP se presentó vitrificación. El objetivo de este trabajo fue implementar el cultivo de brotes de C. tenuiflora en un biorreactor de inmersión temporal y evaluar la concentración de compuestos fenólicos, flavonoides y su actividad antioxidante. Se definió un medio de cultivo (MCmod) para la multiplicación de los brotes de C. tenuiflora a partir de un diseño ortogonal L9 Taguchi considerando las siguientes factores: A) relación nitrato:amonio; B) concentración de sacarosa; C) tidiazurón y D) espermina, observándose que la mejor combinación fue nitrato:amonio 24:1, 45g/L de sacarosa y 5 M de espermina. Posteriormente, se evaluó la influencia de la duración (5 y 30 min) y la frecuencia de inmersión (3 y 24 h) en el IMB y las características de los brotes utilizando medio B5 sin fitorreguladores. Tanto la duración como la frecuencia de inmersión tuvieron un efecto significativo (p<0.05) en el IMB. En la condición RII (5 min de inmersión cada 24 h) se obtuvo un IMB de 6 brotes/explante, no se presentó vitrificación y todos los brotes formaron raíz. En estas condiciones de operación se probó el medio MCmod, lográndose un IMB de 10 brotes/explante. Los brotes obtenidos por cultivo en inmersión temporal presentaron una supervivencia del 100% al transferirlos a sustrato sólido. Por otro lado, brotes desarrollados en RIV (30 min de inmersión cada 24 h) presentaron el mayor contenido de fenoles totales (86.10±4.19 mg Equivalentes de Ácido Gálico/g extracto) y flavonoides (120.86±11.74 mg Equivalentes de Catequina/g de extracto) lo cual coincidió con la mayor actividad antioxidante contra ABTS (476.99±15.11 μmoles Trolox/g extracto). Sin embargo, la mayor actividad contra DPPH (288.99±43.99 μmoles Trolox/g extracto) se obtuvo en RII y el mayor poder reductor en RI (5 min de inmersión cada 3 h) presentaron el mayor poder reductor (1042.24±33.81 μmoles Trolox/g extracto). Con la implementación del sistema de inmersión temporal se estableció una metodología eficiente para la micropropagación in vitro de C. tenuiflora.