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Título : Efecto estimulador del calcitriol a través del receptor de la vitamina D en la expresión génica y secreción de la prolactina de origen linfocitario
Autor : DR. ROJAS HERNÁNDEZ, SAÚL
DRA. MÉNDEZ HERNÁNDEZ, ISABEL CRISTINA
Q.F.B. MARTINEZ REZA, ISELA
Palabras clave : calcitriol
vitamina D
prolactina
Fecha de publicación : 22-sep-2011
Resumen : Prolactin is a protein hormone that is produced by the pituitary lactotrophs and also by extrapituitary sites such as decidua and lymphocytes. Calcitriol, the active form of vitamin D3, is a secosteroid with immunomodulatory actions that exerts its effects through vitamin D receptor (VDR). It is known that calcitriol stimulates PRL expression in pituitary cells in culture as well as in decidua. However, regulators of lymphocyte prolactin synthesis are less known. The aim of this study was to evaluate the effect of calcitriol on the mRNA expression and secretion of PRL in cultured peripheral blood mononuclear cells (PBMNC) from healthy subjects. PBMNC were cultured with different concentrations of calcitriol in the absence or presence of a VDR antagonist. The presence of VDR was evaluated by Westernblot. PRL, and highly responsive genes for calcitriol such as VDR, CYP24A1 and CYP27B1 mRNA expression were evaluated by RT and real time PCR. PRL secretion was quantified by ELISA and protein-VDRE binding was assessed by EMSA. Immunoblots showed the presence of a 48-kDa VDR form in PHA treated PBMNC and Jurkat cells, while a 75-kDa form was recognized in both, nonactivated and activated cells. Treatment with calcitriol increased both, PRL and CYP24A1 mRNA expression only in non-activated cells, in a dose-dependent manner. Incubation with VDR antagonist reverted the stimulatory effect of calcitriol upon PRL expression. In activated cells, calcitriol increased CYP27B1 and VDR expression. EMSA analysis showed that lysates of non-activated cells contained a protein that binds to VDRE. In conclusion, calcitriol stimulates PRL and CYP24A1 gene expression in non-activated lymphocytes through a VDR-mediated mechanism. This study provides evidence that calcitriol exerts differential effects depending on activation cellular state which could be related to the presence of functional VDR isoforms in lymphocytes.
Descripción : La prolactina es una hormona-citocina que se sintetiza principalmente en la hipófisis anterior, pero también en sitios extrahipofisarios como la decidua placentaria y los linfocitos. Por otra parte, el calcitriol, metabolito activo de la vitamina D3, es un secoesteroide que ejerce sus efectos biológicos a través de unirse al receptor nuclear de la vitamina D (VDR). Es conocido que el calcitriol, aumenta la expresión de la PRL en la hipófisis y la decidua placentaria, sin embargo, posibles efectos del calcitriol en la regulación de la síntesis de la PRL de origen linfocitario no habían sido estudiados. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del calcitriol en la expresión del RNAm y la secreción de PRL en células mononucleares de sangre periférica (CMNP). Las células obtenidas de individuos sanos se cultivaron en ausencia o presencia de fitohemaglutinina (PHA) para inducir la activación celular y la expresión del VDR. Las células fueron incubadas con diferentes concentraciones de calcitriol, en ausencia o presencia de un antagonista del VDR. La presencia del VDR en lisados celulares se analizó por Western-blot, la expresión del gen de la PRL, de CYP24A1, CYP27B1 y VDR se evaluó por RT-qPCR, la secreción de PRL al medio de cultivo se cuantificó por ELISA y la interacción del VDR con secuencias marcadas de elementos de respuesta a VDR (VDRE) se analizó por EMSA. Los resultados mostraron la presencia de la forma del VDR de 48 kDa en células activadas y células Jurkat, mientras que una isoforma de 75 kDa estuvo presente en células tanto no activadas, como activadas. El calcitriol aumentó de manera dependiente de la dosis tanto la expresión del RNAm, como la secreción de PRL y de CYP24A1, solamente en células no activadas. Estos efectos fueron revertidos en presencia del antagonista del VDR. La incubación con calcitriol estimuló la expresión del VDR y del CYP27B1 en células activadas. Una proteína presente en los lisados provenientes de células no activadas modificó la movilidad electroforética de secuencias correspondientes a los VDRE. En conclusión, el calcitriol modifica 7 positivamente tanto la expresión del RNAm, como la secreción de la PRL linfocitaria, a través de un mecanismo dependiente del VDR. El calcitriol ejerce efectos diferenciales en la expresión de genes dependiendo del estado de activación celular, lo que puede deberse a la presencia diversas isoformas del VDR.
URI : http://www.repositoriodigital.ipn.mx/handle/123456789/12252
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